Kuinka Sangerin DNA-sekvensointi toimii?
Kuinka Sangerin DNA-sekvensointi toimii?

Video: Kuinka Sangerin DNA-sekvensointi toimii?

Video: Kuinka Sangerin DNA-sekvensointi toimii?
Video: BI5 DNA-sekvensointi Sanger-menetelmällä 2024, Marraskuu
Anonim

Sangerin sekvensointi tuloksena muodostuu eri pituisia pidennystuotteita, jotka on päätetty dideoksinukleotideilla 3' -päässä. Jatkotuotteet erotetaan sitten kapillaarielektroforeesilla tai CE:llä. Molekyylit ruiskutetaan sähkövirralla pitkälle lasikapillaarille, joka on täytetty geelipolymeerillä.

Mikä tällä tavalla on Sangerin DNA-sekvensointimenetelmä?

Sangerin sekvensointi , joka tunnetaan myös nimellä ketjun päättäminen menetelmä , on tekniikka DNA-sekvensointi perustuu ketjun päättävien dideoksinukleotidien (ddNTP: t) valikoivaan liittämiseen DNA polymeraasi in vitro DNA replikointi. Sen on kehittänyt Frederick Sanger ja kollegat vuonna 1977.

Lisäksi, miten ketjun päättämisen sekvensointi toimii? Sangerin DNA jaksotus tunnetaan myös nimellä ketju - irtisanominen menetelmä jaksotus . ddNTP: t johtavat irtisanominen Koska ddNTP:istä puuttuu 3'-OH-ryhmä, jota tarvitaan fosfodiesterisidoksen muodostumiseen nukleotidien välillä. Ilman tätä sidosta ketju muodostuvien nukleotidien määrä on lopetettu.

Yksinkertaisesti niin, miksi teemme Sanger-sekvensointia?

Sanger-sekvensointi on a menetelmä / DNA -sekvensointi perustuu ketjun päättävien dideoksinukleotidien selektiiviseen sisällyttämiseen DNA polymeraasin aikana in vitro DNA replikointi. Sillä on edelleen etu lyhyeen lukemiseen verrattuna jaksotus teknologioita (kuten Illumina) että se voi tuottaa DNA-sekvenssi > 500 nukleotidin lukemat.

Onko Sangerin sekvensointi tarkka?

Sangerin sekvensointi 99,99 % tarkkuus on kliinisen tutkimuksen "kultastandardi". jaksotus . Uudemmat NGS-tekniikat ovat kuitenkin yleistymässä myös kliinisissä tutkimuslaboratorioissa niiden suuremman suorituskyvyn ja alhaisempien näytekohtaisten kustannusten vuoksi.

Suositeltava: