Sisällysluettelo:

Kuinka lisäät geenin plasmidiin?
Kuinka lisäät geenin plasmidiin?

Video: Kuinka lisäät geenin plasmidiin?

Video: Kuinka lisäät geenin plasmidiin?
Video: Geenin kloonaus bakteerissa (1) 2024, Marraskuu
Anonim

Perusvaiheet ovat:

  1. Leikkaa auki plasmidi ja "liitä" sisään geeni . Tämä prosessi perustuu restriktioentsyymeihin (jotka leikkaavat DNA:ta) ja DNA-ligaasiin (joka yhdistää DNA:n).
  2. Lisää the plasmidi osaksi bakteerit.
  3. Kasvaa paljon plasmidi -kantavia bakteereja ja käyttää niitä "tehtaina" proteiinin valmistamiseen.

Lisäksi, kuinka geeni voidaan liittää plasmidiin GCSE?

se on insertoidaan plasmidiin käyttämällä ligaasientsyymejä. the plasmidi menee osaksi bakteerisolu. siirtogeeninen bakteeri lisääntyy, mikä johtaa sisään miljoonia identtisiä bakteereja, jotka tuottavat ihmisinsuliinia.

Lisäksi, kuinka subkloonaat geenin? Perusvaiheet varten Subkloonaus Vapautat ja puhdistat insertin emovektorista, liität tämän insertin valmisteltuun kohdevektoriin, muunnat tämän ligaatioreaktion päteviksi bakteerisoluiksi. Sitten seulotaan muunnetut solut lisäystä varten.

Kun tämä otetaan huomioon, mitkä ovat geenikloonauksen 4 vaihetta?

Klassisissa restriktioentsyymidigestio- ja ligaatiokloonausprotokollassa minkä tahansa DNA-fragmentin kloonaus sisältää olennaisesti neljä vaihetta:

  • kiinnostavan DNA:n (tai kohde-DNA:n) eristäminen,
  • ligaation,
  • transfektio (tai transformaatio) ja.
  • seulonta-/valintamenettely.

Kuinka monistat plasmidin?

Kokeellinen menettely

  1. Suorita PCR ja puhdista PCR-tuote: Suorita PCR monistaaksesi insertti-DNA.
  2. Pilko DNA:si:
  3. Eristä inserttisi ja vektorisi geelipuhdistuksella:
  4. Liitä inserttisi vektoriin:
  5. Muunnos:
  6. Eristä valmis plasmidi:
  7. Tarkista plasmidi sekvensoimalla:

Suositeltava: