Sisällysluettelo:

Miten valitset klooneja?
Miten valitset klooneja?

Video: Miten valitset klooneja?

Video: Miten valitset klooneja?
Video: Miten valitset oikean rullan? 2024, Marraskuu
Anonim

Kun valitsemalla a klooni , varmista, että juuret ovat vahvat, valkoiset ja innokkaasti kasvualustasta ulkonevat. Jos juuret ovat ruskeita ja kutistuneet tai vaikuttavat muuten toimimattomilta, laita se takaisin ja etsi parempi.

Sitä paitsi, kuinka kloonaat yhden solun?

  1. Laske solut, jotta voit laittaa noin 16 000 solua 96-kuoppaisen levyn ensimmäiseen kuoppaan (A1), joka sisältää 200 ui väliainetta.
  2. Poista 100 µL A1:tä sisältävistä soluista ja sekoita B1:n kanssa pipetoimalla ylös ja alas 3x sekoittaaksesi hyvin ennen kuin poistat 100 µL ja sekoitat C1:n kanssa jne.

Lisäksi, miten valitset nisäkässolupesäkkeen? Aseta levy mikroskoopin alle valitaksesi erilaistumattomia terveitä siirtokuntia . Valitse pesäkkeitä käyttämällä P-20-pipettiä, joka on asetettu 10 ul:iin. Huolellisesti valita a siirtomaa rikkomatta siirtomaa sinkkuksi soluja ja siirrä se 96-kuoppaiselle levylle trypsiinin kanssa. Pipetoi ylös ja alas pari kertaa hajottaaksesi siirtomaa.

Vastaavasti, kuinka käytät kloonisylinteriä?

Käyttämällä steriilit keskipitkät pihdit, poimi a kloonaussylinteri . Paina varovasti tasaista pohjaa sylinteri sileään silikonirasvaan ja poista se äkillisellä pystyliikkeellä. Oikein tehtynä rasva jakautuu tasaisesti kotelon pohjalle sylinteri . Aseta sylinteri siirtokunnan yli.

Kuinka valitset pesäkkeet stabiileille solulinjoille?

Protokolla stabiilien solulinjojen luomiseksi vaatii useita vaiheita, kuten alla on esitetty:

  1. Luo tappokäyrä määrittääksesi optimaalisen antibioottikonsentraation.
  2. Transfektoi solut halutuilla plasmidikonstrukteilla
  3. Valitse ja laajenna vakaat polyklonaaliset pesäkkeet.
  4. Tunnista yksittäiset kloonit rajoitetun laimentamisen ja laajentamisen avulla.

Suositeltava: