Mitä tapahtuu, jos lisäät liikaa restriktioentsyymiä?
Mitä tapahtuu, jos lisäät liikaa restriktioentsyymiä?

Video: Mitä tapahtuu, jos lisäät liikaa restriktioentsyymiä?

Video: Mitä tapahtuu, jos lisäät liikaa restriktioentsyymiä?
Video: Näin lisäät autoosi itse öljyä | Mitä tapahtuu, jos lisään liian vähän tai liikaa öljyä? | AUTODOC 2024, Marraskuu
Anonim

Epätäydellistä ruoansulatusta voi esiintyä kun liikaa tai liian vähän entsyymi käytetään. The epäpuhtauksien läsnäolo sisällä the DNA näyte voi estää entsyymejä , mikä myös johtaa epätäydelliseen ruoansulatukseen. Jonkin verran restriktioentsyymit vaativat kofaktoreita täydelle aktiivisuudelle.

Sitä paitsi, miksi restriktioentsyymit lisätään viimeisenä?

The restriktioentsyymi on yleensä kestää komponentti lisätty reaktioon varmistaakseen, ettei se altistu ääriolosuhteille. Koottu reaktio tulee sekoittaa sen jälkeen entsyymi lisäys. Sekoita kaikki liuokset, jotka sisältävät restriktioentsyymit varovasti välttääkseen entsyymi inaktivointi.

Lisäksi kuinka restriktioentsyymien sulatusta voidaan parantaa? Älä käytä suositeltua enempää entsyymi määrä (esim. 10 yksikköä entsyymi mikrogrammaa DNA:ta kohti). Vähennä määrää entsyymi reaktiossa tarvittaessa. Vältä pitkäaikaista inkubaatiota ruoansulatus reaktio. Käytä suositeltua reaktiopuskuria.

Tiedä myös, miksi restriktioentsyymi ei leikkaa?

Pilkottavan DNA:n valmistelu pitäisi ei saa sisältää epäpuhtauksia, kuten fenolia, kloroformia, alkoholia, EDTA:ta, pesuaineita tai liiallisia suoloja, jotka kaikki voivat häiritä restriktioentsyymi toiminta. Jos läsnä on inhibiittoria (usein suolaa, EDTA:ta tai fenolia), kontrolli-DNA toimii ei leikata sekoituksen jälkeen.

Miksi entsyymimäärä voi aiheuttaa tähtien toimintaa?

Tähtitoiminta on rajoituksen spesifisyyden lieventäminen tai muuttaminen entsyymi välittämä DNA:n pilkkominen voi tapahtuvat reaktio-olosuhteissa, jotka eroavat merkittävästi optimaalisista reaktio-olosuhteista entsyymi . Tähtitoiminta voi tapahtuu Mg:n läsnäolon vuoksi2+, kuten On nähdään esimerkiksi HindIII:ssa.

Suositeltava: