Mikä on ddNTP:n käytön tarkoitus?
Mikä on ddNTP:n käytön tarkoitus?

Video: Mikä on ddNTP:n käytön tarkoitus?

Video: Mikä on ddNTP:n käytön tarkoitus?
Video: Sanger sequencing 2024, Marraskuu
Anonim

DdNTP viittaa Dideoksinukleotidit trifosfaatit, joita käytetään Sangerin dideoksimenetelmässä tuottamaan eripituisia DNA-säikeitä DNA-sekvensointia varten. Tämä johtaa DNA-polymerointiprosessin (tai DNA:n elongaatioprosessin) päättymiseen, koska tämä prosessi tarvitsee 3'-OH-ryhmän jatkuakseen.

Tästä syystä, miksi ddNTP:itä käytetään sekvensoinnissa?

Dideoksinukleotidit ovat DNA-polymeraasin ketjua pidentäviä estäjiä, käytetty Sangerin menetelmässä DNA:lle jaksotus . Dideoksiribonukleotideissa ei ole 3'-hydroksyyliryhmää, joten ketjun pitenemistä ei enää voi tapahtua, kun tämä dideoksinukleotidi on ketjussa. Tämä voi johtaa DNA:n lopettamiseen järjestyksessä.

Samoin, kiinnittyvätkö ddNTP:t dNTP:ihin? Yksi tai useampi niistä dNTP:t on radioaktiivisesti leimattu replikointituotteiden visualisoinnin helpottamiseksi. Lopuksi jokainen putki saa yhden neljästä erityisestä nukleotidista dideoksinukleotidit ( ddNTP:t ). Sisältymisen jälkeen DNA-polymeraasi ei kuitenkaan voi jatkaa ketjua, koska se tarvitsee 3'-OH:n liittää seuraavaan nukleotidiin.

Samalla tavalla voidaan kysyä, kuinka ddNTP:t pysäyttävät sekvensointireaktion?

Kun sitä on pieninä määrinä reaktioiden sekvensointi dideoksiribonukleosiditrifosfaatit ( ddNTP:t ) lopettaa sekvensointireaktio eri kohdissa kasvavissa DNA-juosteissa. ddNTP:t pysäyttävät sekvensointireaktion koska ne: saavat DNA-polymeraasin putoamaan templaattijuosteesta. c.

Mitä tekniikkaa, johon liittyy dideoksinukleotidejä, voitaisiin käyttää?

Sanger-sekvensointi on a menetelmä DNA-sekvensointi perustuu ketjun päättämisen selektiiviseen sisällyttämiseen dideoksinukleotidit DNA-polymeraasin vaikutuksesta in vitro DNA:n replikaation aikana. Frederick Sangerin ja kollegoiden vuonna 1977 kehittämä se oli laajin käytetty jaksotus menetelmä noin 40 vuoden ajan.

Suositeltava: