Miten Gibsonin kloonaus toimii?
Miten Gibsonin kloonaus toimii?

Video: Miten Gibsonin kloonaus toimii?

Video: Miten Gibsonin kloonaus toimii?
Video: Miten Wattinen toimii? 2024, Marraskuu
Anonim

The Gibsonin kloonaus Master Mix koostuu kolmesta eri entsyymistä yhdessä puskurissa. Jokaisella entsyymillä on erityinen ja ainutlaatuinen toiminto reaktiolle: T5-eksonukleaasi - luo yksijuosteisen DNA:n 3'-ulokkeita pureskelemalla takaisin DNA:n 5'-päästä. Komplementaariset DNA-fragmentit voivat myöhemmin liittyä toisiinsa.

Tämän huomioon ottaen, miten Gibson toimii?

The Gibson Assembly®-menetelmä on kloonausmenettely, joka mahdollistaa kahden tai useamman fragmentin kloonauksen ilman restriktioentsyymihajotusta tai yhteensopivia restriktiokohtia. Sen sijaan fragmentteihin on sisällytetty käyttäjän määrittämät limittäiset päät vierekkäisten fragmenttien saumattoman liittämisen mahdollistamiseksi.

Samoin mitä Gibson Assembly Master Mixissä on? The Gibson Cloning Master Mix koostuu kolmesta eri entsyymistä yhdessä puskurissa. Jokaisella entsyymillä on erityinen ja ainutlaatuinen toiminto reaktiolle: T5-eksonukleaasi - luo yksijuosteisen DNA:n 3'-ulokkeita pureskelemalla takaisin DNA:n 5'-päästä. Komplementaariset DNA-fragmentit voivat myöhemmin liittyä toisiinsa.

Kuinka Golden Gate -kokoonpano toimii tällä tavalla?

kultainen portti kloonaus tai Golden Gate -kokoonpano on molekyylikloonausmenetelmä, jonka avulla tutkija voi samanaikaisesti ja suuntaavasti koota useita DNA-fragmentteja yhdeksi kappaleeksi käyttämällä tyypin IIs restriktioentsyymejä ja T4 DNA-ligaasia. Tämä kokoonpano on suoritettu in vitro.

Miten Gateway-kloonaus toimii?

The GATEWAY Kloonaus Tekniikka perustuu paikkaspesifiseen rekombinaatiojärjestelmään, jota faagi l käyttää DNA:nsa integroimiseen E:hen. Lisättyä faagi-DNA:ta ympäröivät attL- ja attR-kohdat rekombinoituvat paikkaspesifisesti leikkaustapahtuman aikana uudistaakseen attP-kohdan faagissa l ja attB-sivusto E.

Suositeltava: